Trypsinisering er prosessen med celledissosiasjon ved bruk av trypsin, et proteolytisk enzym som bryter ned proteiner, for å dissosiere adherente celler fra karet de dyrkes i. Når trypsin tilsettes til en cellekultur, bryter det ned proteinene som gjør at cellene kan feste seg til karet.
Hvorfor trypsiniserer vi celler?
Trypsinisering gjøres ofte for å tillate passasje av cellene til en ny beholder, observasjon for eksperimentering eller reduksjon av konfluensgraden i kolben ved å fjerne en prosentandel av cellene.
Hvordan fungerer trypsin for å løsne celler?
Trypsin/EDTA er en kombinert metode for å løsne celler. Trypsin kutter adhesjonsproteinene i celle-celle- og celle-matrise-interaksjoner ved å kutte aminosyren til adhesjonsproteinene spesifikt ved lysin eller aginin på C-terminalen hvis oppstrøms aminosyre ikke er prolin.
Hvordan får du trypsiniserte adherente celler?
Prosedyre
- Fjern mediet fra kulturkaret ved aspirasjon og vask monolaget med en s altløsning fri for Ca2+ og Mg 2+ for å fjerne alle spor av serum. …
- Dispenser nok trypsin eller trypsin/EDTA-løsning i kulturkar(er) til å dekke monolaget av celler fullstendig og plasser i 37 °C inkubator i ~2 minutter.
Hvordan deaktiverer jeg trypsin i cellekultur?
Når cellene vises løsrevet, legg til 2 bindav forvarmet komplett vekstmedium for å inaktivere trypsin. Disperger mediet forsiktig ved å pipettere over cellelagets overflate flere ganger for å sikre gjenvinning av >95% av cellene. For serumfrie kulturer, soyabønnetrypsinhemmer (produktnr.
