For det første etterlater både EcoR1 og Xba1 5' overheng når de fordøyer DNA (det samme gjør Nde1). I begge tilfeller er 3'-enden forsenket, og det er grunnen til at polyermase kan legge til baser. For det andre kan alle polymeraser bare legge til baser til en 3'-ende, så Klenow vil legge til 4 baser til den tilbaketrukkete 3'-enden av begge nettstedene for å generere butte ender.
Forlater restriksjonsenzymer en 5-fosfat?
Vektorer og inserts fordøyd av restriksjonsenzymer inneholder de nødvendige terminale modifikasjonene (5'-fosfat og 3'-hydroksyl), mens fragmenter skapt av Polymerase Chain Reaction (PCR) kanskje ikke.
Kan butte ender ligeres?
Blunt-end ligering
Blunt end ligering involverer ikke base-paring av de utstikkende endene, så enhver butt ende kan ligeres til en annen butt ende. Stumpe ender kan genereres av restriksjonsenzymer som SmaI og EcoRV.
Gir Taq-polymerase butte ender?
Yes… Taq Polymerase legger til A-Overhangs hvis du holder siste utvidelsestrinn ved 72 dC på PCR. Mest brukt til TA-kloning.
Hvorfor bruke Klenow-fragment i DNA-sekvensering?
Klenow-fragmentet er ekstremt nyttig for forskningsbaserte oppgaver som: Syntese av dobbelttrådet DNA fra enkelttrådede maler . Fyll inn tilbaketrukket 3'-ender av DNA-fragmenter for å gjøre 5'-overheng stump . Fordøyer utstikkende 3'-overheng.
